細(xì)胞培養(yǎng)實驗室的環(huán)境設(shè)計
日期:
2022-05-11
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細(xì)胞培養(yǎng)是一種無菌操作技術(shù),要求工作環(huán)境和條件必須保證無微生物污染和不受其它有害因素的影響。細(xì)胞培養(yǎng)室和設(shè)計原則是防止微生物污染和有害因素影響,要求工作環(huán)境清潔、空氣清新、干燥和無煙塵。細(xì)胞培養(yǎng)室的設(shè)計原則一般是無菌操作區(qū)設(shè)在室內(nèi)較少走動的內(nèi)側(cè),常規(guī)操作和封閉培養(yǎng)于一室,而洗刷消毒在另一室。(1)超凈工作臺:也稱凈化工作臺,分為側(cè)流式,直流式和外流式三大類。(2)無菌操作間:一般由更衣間、緩沖間和操作間三部分組成。操作間放置凈化工作臺及二氧化碳培養(yǎng)箱、離心機(jī)、倒置顯微鏡等。緩沖間可放置電冰箱、冷藏器及消毒好的無菌物品等。(3)操作間:普通培養(yǎng)箱、離心機(jī)、水浴鍋、定時鐘、普通天平及日常分析處理物。(4)洗刷消毒間:烤箱、消毒鍋、蒸餾水處理器及酸缸等。(5)分析間:顯微鏡、計算機(jī)及打印機(jī)等。??常用細(xì)胞培養(yǎng)器皿有培養(yǎng)瓶、培養(yǎng)板、培養(yǎng)皿等。常準(zhǔn)備量是使用量的三倍。器皿應(yīng)選擇透明度好、無毒、利于細(xì)胞粘附和生長的材料,常用一次性聚苯乙烯材料制品或中性硬度玻璃制品。常用的器皿有下面幾種:(1)液體儲存瓶:用于儲存各種配制好的培養(yǎng)液,血清等液體,常用規(guī)格有500ml、250ml、100ml等幾種。(2)培養(yǎng)瓶:根據(jù)培養(yǎng)細(xì)胞種類要求不同培養(yǎng)瓶的形態(tài)各異,用于細(xì)胞傳代培養(yǎng)的細(xì)胞要求瓶壁厚簿均勻,便于細(xì)胞貼壁生長和觀察,瓶口要大小一致,口徑一般不小于1cm,允許吸管伸入瓶內(nèi)任何部位,規(guī)格有200ml、100ml、50ml、25ml、10ml等幾種。(3)培養(yǎng)皿:用于開放式培養(yǎng)及其它用途。分直徑30mm、60mm、120mm等幾種。(4)吸管:常用的有長吸管和短吸管兩類,長吸管也稱刻度吸管。其改良后管上部有球型刻度稱改良吸管,刻度吸管用于移動液體。常用1ml和10ml兩種。短吸管也叫滴管,分彎頭和直頭兩種。(5)離心管:離心管是細(xì)胞培養(yǎng)中使用最廣泛的器皿,根據(jù)用途不同形態(tài)各樣,常用于細(xì)胞培養(yǎng)的離心管有大腹式尖底離心管和普通尖底離心管兩類。前者分別為50ml、30ml、15ml,后者則多為10ml和5ml。(6)其它:如三角燒瓶、燒杯、量筒、漏斗、注射器等。維持培養(yǎng)細(xì)胞旺盛生長,必須有恒定而適宜的溫度。不同種類的細(xì)胞對培養(yǎng)溫度要求也不同。人體細(xì)胞培養(yǎng)的標(biāo)準(zhǔn)溫度為36.5℃±0.5℃,偏離這一溫度范圍,細(xì)胞的正常代謝會受到影響甚至死亡。培養(yǎng)細(xì)胞對低溫的耐受力較對高溫強(qiáng),溫度上升不超過39℃時,細(xì)胞代謝與溫度成正比;人體細(xì)胞在39-40℃1小時,即能受到一定損傷,但仍有可能恢復(fù);在40-41℃1小時,細(xì)胞會普遍受到損傷,僅小半數(shù)有可能恢復(fù);41-42℃1小時,細(xì)胞受到嚴(yán)重?fù)p傷,大部分細(xì)胞死亡,個別細(xì)胞仍有恢復(fù)可能;當(dāng)溫度在43℃以上1小時,細(xì)胞全部死亡。相反,溫度不低于0℃時,對細(xì)胞代謝雖有影響,但并無傷害作用;把細(xì)胞放入25-35℃時,細(xì)胞仍能生存和生長,但速度減慢;放在4℃數(shù)小時后,再回到37℃培養(yǎng),細(xì)胞仍能繼續(xù)生長。細(xì)胞代謝隨溫度降低而減慢。當(dāng)溫度降至冰點以下時,細(xì)胞可因胞質(zhì)結(jié)冰受損而死亡。但是,如果向培養(yǎng)液中加入一定量的冷凍保護(hù)劑(二甲亞砜或甘油),可在深低溫下如-80℃或-196℃(液氮)長期保存。???氣體是哺乳動物細(xì)胞培養(yǎng)生存必需條件之一,所需氣體主要有氧氣和二氧化碳。氧氣參與三羧酸循環(huán),產(chǎn)生供給細(xì)胞生長增殖的能量和合成細(xì)胞生長所需用的各種成分。開放培養(yǎng)時一般把細(xì)胞置于95%空氣加5%二氧化碳混合氣體環(huán)境中。二氧化碳既是細(xì)胞代謝產(chǎn)物,也是細(xì)胞生長繁殖所需成分,它在細(xì)胞培養(yǎng)中的主要作用在于維持培養(yǎng)基的pH值。大多數(shù)細(xì)胞的適宜pH為7.2-7.4,偏離這一范圍對細(xì)胞培養(yǎng)將產(chǎn)生有害的影響。但細(xì)胞耐酸性比耐堿性大一些,在偏酸環(huán)境中更利于細(xì)胞生長。但有一些細(xì)胞也喜歡偏堿環(huán)境中生長,如成纖維細(xì)胞最適合pH是7.4-7.6。每種細(xì)胞都有其最適pH值。